大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养指南

泛亚电竞提供的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的培养说明如下，确保您能够顺利地进行细胞培养和实验操作。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性：贴壁悬浮混合生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：F12K+20% FBS + 1% P/S
传代方法：首次传代比率建议为1:2，传代间隔为2天换液。

备注：悬浮细胞通过离心收集，贴壁细胞应按贴壁培养方法处理，使用无菌离心管收集培养基留作过渡培养。

二、细胞收到后的处理

在细胞培养到良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是最佳的运输方法。在收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，再在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数的图像（建议40x、100x和200x各一张），前三天的照片是售后服务的重要依据。如果未提供照片，将自动视为状态良好。

传代后建议：建议将一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶用自己配制的完全培养基，以便进行对比培养。换液后拧松瓶盖以释放气体。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基再放入37℃、5% CO2孵箱培养；如细胞密度超过80%，可以进行传代培养：

1）对于贴壁细胞：

• 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
• 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态。
• 当细胞大部分变圆并已脱落后，迅速将培养瓶取回，轻敲瓶底后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
• 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，去掉上清液后加1-2ml完全培养基重悬。
• 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

2）对于悬浮细胞：

• 方法一：收集细胞，在1000 RPM条件下离心8-10分钟，去掉上清，补加1-2ml培养液并吹匀，按1:2的比例分配至新瓶中，含8ml完全培养基。
• 方法二：选择半数换液方式，弃去一半培养基，将剩余细胞悬起，按1:2比例分配至新瓶中，补充8ml完全培养基。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶面积达到80%时，弃去培养液，使用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞收缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 rpm离心5分钟。
3. 去掉上清，加入1ml强生生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需先在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护设施），迅速将其置于37℃水浴中解冻，直至冻存管无结晶，随后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管内细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 rpm离心5分钟。
3. 去掉上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养，第二天更换为新鲜培养基。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会由于贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如出现大量脱落，可将所有培养液收集至离心管中，1000 rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养。沉淀细胞后，加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬后消化1-2分钟，再加入5ml完全培养基以终止反应。紧接着再次离心，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。进行分瓶传代时，按1:2比例分配（两个T25瓶），再补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

有关于细胞出现问题的重发条件包括：

1. 细胞运输途中遭遇的问题，例如细胞丢失或瓶身破损等情况，均可申请重发。
2. 如在收到产品48小时内提供真实实验结果以证明细胞污染，则可核实后重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时或干冰冻存发货的细胞复苏24小时后，绝大多数细胞未存活需提供真实清晰的细胞状态照片，验证后可重发。
4. 干冰运输的细胞复苏后24小时内或常温运输的细胞静置4小时后未开封出现污染，同样可以申请重发。
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提出使用台盼蓝染色法检测细胞活力的真实结果，核实后予以重发。
6. 收到细胞的当天以及接下来的第二、三天必须拍照，如超出三天未告知则视为产品合格。若在4-7天内出现问题并提供三天内的照片和详细操作步骤，经技术人员确认责任属我方则可重发。
若技术人员判定为双方责任，协商处理或按合同价格50%收费重发。

注意：因客户原因造成的细胞污染或操作不当导致细胞状态不佳的情况，将不予重发。详细的条件及处理方式需视具体情况而定。

如需了解更多信息，欢迎访问泛亚电竞网站，我们将竭诚为您服务！