麻醉动物蛋白提取试剂盒说明

泛亚电竞的哺乳动物蛋白提取试剂盒包含以下成分：

• 5X Buffer：10ml
• 5X NaCl：10ml
• 5X SDS：10ml
• 5X DOC：10ml
• 5X NP-40：10ml
• 20X PBS：10ml
• Protease inhibitor cocktail：0.5ml

保存条件

该试剂盒可以在常温下保存，除Protease inhibitor cocktail外，需存放于-20°C。其保质期为24个月。

蛋白提取步骤

1. 准备细胞裂解缓冲液

根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40以1:1:1:1:1的比例配制细胞裂解缓冲液。每1ml细胞裂解缓冲液适用于提取106~107个细胞或5~20mg组织的蛋白质。在使用前，加入10μl Protease inhibitor cocktail。

2. 洗涤细胞或组织

a. 对于贴壁细胞：

清除生长培养基，用PBS缓冲液冲洗细胞两遍，加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml），将细胞放入冰袋中，摇床孵育30分钟，并阶段性重悬，最后刮取并收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：

在700xg下离心5分钟，弃去上清液。用PBS重悬洗涤细胞两次，4°C下离心并去除上清。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（106~107个cells/ml），在冰袋中孵育30分钟。

c. 对于组织：

将组织切块，并用PBS冲洗两次。加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），将样品转移至预冷的微量匀浆器中，并在冰上均质化30~50次。注意，均质过程对靶蛋白的功能完整性至关重要。然后在34°C下以12,000xg离心裂解的细胞10分钟来沉淀细胞碎片，或使用100,000xg离心45分钟以制备蛋白质溶液。

3. 保存含蛋白质的上清液

将含有蛋白质的上清液移至冷冻管中。在冰上可立即使用，或将蛋白质溶液保存在-70°C。使用泛亚电竞的蛋白提取试剂盒可以确保高效、安全的蛋白提取，助力您的科研工作。